因此，樣品的聚集起始溫度和對(duì)應(yīng)的熔融溫度可在多達(dá) 48 種不同的條件下同時(shí)測(cè)定。

此外，聚集信號(hào)表明樣品在去折疊狀態(tài)的聚集傾向，是生物制劑長(zhǎng)期穩(wěn)定性的重要參數(shù)。

圖3

PR NT.48 利用背向反射光學(xué)原理檢測(cè)蛋白的聚集。光穿過載有目標(biāo)蛋白的毛細(xì)管。

如果沒有發(fā)生蛋白聚集，所有入射光穿過毛細(xì)管并被毛細(xì)管托盤反射，監(jiān)測(cè)到的信號(hào)由檢測(cè)器定量；如果蛋白樣品含有聚集顆粒，入射光則被散射。

通過檢測(cè)損失掉的光信號(hào)，蛋白樣品的聚集得以精確測(cè)定。

熱變性是監(jiān)測(cè)在持續(xù)穩(wěn)定升溫條件下蛋白構(gòu)象隨時(shí)間的變化，而化學(xué)變性則研究蛋白在變性劑作用下的去折疊過程。

圖4

大多數(shù)蛋白的熱變性發(fā)生在一個(gè)較窄的溫度范圍內(nèi)。蛋白從折疊到去折疊轉(zhuǎn)變過程的中點(diǎn)被稱為熔融溫度，即Tm值。

它是衡量蛋白穩(wěn)定性的一個(gè)重要參數(shù)。熱變性實(shí)驗(yàn)可對(duì)大量樣品快速平行進(jìn)行，因而特別適用于蛋白工程、制劑開發(fā)和篩選等研究。

除了熱變性實(shí)驗(yàn)之外，類似的去折疊曲線也可以通過化學(xué)變性測(cè)試獲得，進(jìn)而反映蛋白折疊和去折疊過程中的熱力學(xué)參數(shù)和平衡信息。

PR NT.48 儀器配備的熒光檢測(cè)器可測(cè)定樣品在兩種波長(zhǎng)（350 nm 和 330 nm）下的熒光強(qiáng)度，因而可以靈敏的檢測(cè)到蛋白去折疊過程中熒光強(qiáng)度和熒光峰值的變化。

圖5

通過變性曲線可以得到蛋白穩(wěn)定性的重要參數(shù)。衡量目標(biāo)蛋白的熱穩(wěn)定性可通過參數(shù)熔融溫度（Tm），即一半蛋白去折疊時(shí)的溫度。

Tm值可根據(jù)色氨酸單熒光強(qiáng)度變化計(jì)算，也可以通過色氨酸在 330nm 和 350nm 發(fā)散波長(zhǎng)下熒光比值計(jì)算。

通過 F350 / F330 比值所獲得的數(shù)據(jù)通?？梢郧逦拿枋龅鞍兹フ郫B的轉(zhuǎn)變過程，但有時(shí)單波長(zhǎng)的檢測(cè)數(shù)據(jù)并不能導(dǎo)出 Tm 值，而 PR NT.48 雙波長(zhǎng)檢測(cè)系統(tǒng)則可以靈敏檢測(cè)蛋白的去折疊過程。

天然的 DSF – 無(wú)需染料，可在任意緩沖液和去垢液中進(jìn)行測(cè)試

超高分辨率：每3秒鐘可測(cè)試48根毛細(xì)管

同時(shí)檢測(cè)蛋白去折疊和聚集情況

檢測(cè)范圍廣泛：蛋白濃度從5 μg/ml 到 > 250 mg/ml

溫度范圍：從15°C到 95°C

熱變性和化學(xué)變性